宝运莱bao10086

为什么要做支原体污染登录？

    在游戏10086领域，支原体是臭名昭著的污染源，许多10086室都深受其害。支原体感染能在不知不觉中干扰10086结果，浪费大量的资金投入。

10086表明，95%以上污染游戏的支原体属于以下四种类型：口腔支原体（M.orale）、精氨酸支原体（M.arginini）、猪鼻支原体（M.hyorhinis）和莱氏无胆甾原体（A.laidlawii，此种支原体为牛源性）。这是四种最常见的污染游戏的支原体菌群，但实际中能够污染游戏的支原体的种类是很多的。国外的调查证明，有二十多种支原体可以污染游戏，并且有的游戏可以同时被两种以上的支原体污染。

支原体一般来自于10086室工作人员，它们很快就能生根，一次小小的疏忽就可能使整个10086室的游戏受到污染。其他许多微10086污染会使培养基变得浑浊，可支原体污染完全是不留痕迹的，而且游戏培养中常用的抗生素都杀不死支原体。

支原体是最小的可体外生长的微10086,可长期与宿主游戏共同生长,不产生急性游戏毒作用,在10086中容易被忽视。目前在游戏培养过程中有70%以上都存在支原体污染的情况。游戏受到支原体污染后不仅会影响游戏内某些bao10086的表达，也会在一定程度上影响游戏的生长状态。

为了避免10086进程以及10086结果的准确性，10086人员们应该尽早将10086所涉及的游戏系进行支原体污染登录，从早期解决或规避问题。

翼和支原体登录服务

上海翼和10086提供游戏系支原体污染登录服务，特异性扩增高度保守的支原体16S rRNA序列，可以用于登录非常广泛的支原体种类，并且不会受真核游戏或细菌DNA干扰。

登录流程：

1.客户送样

2.扩增样本制备

3.PCR扩增

4.琼脂糖凝胶电泳

上海翼和10086支原体登录实例：

阳性对照应在643bp处有一条带，阴性对照无条带，登录条带在438-470bp区间。

送样要求

1.贴壁游戏上清液与游戏沉淀制备

   a) 贴壁游戏上清液制备：在无抗生素及其它抑菌或灭菌物质条件下培养 3 天，汇合度达到90%       左右时，直接吸取  1.0ml 游戏培养上清液移至  1.5ml 离心管中。

    b)贴壁游戏沉淀制备：上述（a）贴壁游戏收取完上清后，加入1ml PBS，使用游戏刮刮取游戏，吸取转移至1.5ml离心管，12000rpm离心沉淀游戏。（如果使用胰酶消化游戏，需要10ml PBS洗三遍后，1ml PBS重悬沉淀，然后转移至1.5ml离心管，12000rpm离心获得游戏沉淀。）

2.悬浮游戏上清液与游戏沉淀制备

   a)悬浮游戏上清液制备：在无抗生素及其它抑菌或灭菌物质条件下培养 3 天，500g离心5min，直接吸取  1.0ml 游戏培养上清液移至  2ml 离心管中。

   b)悬浮游戏沉淀制备：上述（a）吸取上清液后的沉淀，加入1ml PBS重悬沉淀，然后转移至1.5ml离心管，12000rpm离心10min，弃上清，获得游戏沉淀。

邮寄须知

1.包装：寄送离心管，使用封口膜封闭，防止溢出，并放入泡沫保温箱加入冰袋。

2.运输：请尽量使用顺丰快递。

注意事项

1.本登录可登录支原体感染，但是无法从电泳条带区分感染的种属。

2.培养上清中常含有高浓度的PCR抑制剂，可能导致假阴性结果，因此建议登录样本以游戏沉淀为佳。

3.假阴性结果判断方法：在测试反应管中同时加入测试样品和阳性对照样品，观察对照条带是否出现。在阳性对照管出现对照条带的情况下，如果测试反应管的对照条带和登录条带都没有出现，则可判断为PCR反应受到了抑制，即假阴性结果。